超微量分光光度計(jì)校準(zhǔn)方式
發(fā)布時(shí)間:2025-06-09
以下是詳細(xì)解析,涵蓋核心步驟、技術(shù)要點(diǎn)及注意事項(xiàng):
一、儀器自校準(zhǔn)功能
1. 原理與目的
超微量分光光度計(jì)通常內(nèi)置自校準(zhǔn)程序,通過儀器自帶的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)(如暗電流校正、光源強(qiáng)度補(bǔ)償)對光學(xué)系統(tǒng)進(jìn)行初始化標(biāo)定。
自校準(zhǔn)可快速修正電子漂移、光源老化等引起的偏差,是日常維護(hù)的基礎(chǔ)步驟。
2. 操作步驟
(1) 進(jìn)入儀器菜單,選擇“自校準(zhǔn)”或“性能驗(yàn)證”模式;
(3) 儀器自動(dòng)調(diào)整至出廠預(yù)設(shè)參數(shù),并生成校準(zhǔn)報(bào)告。
3. 局限性
自校準(zhǔn)無法糾正波長偏移或光路物理變化(如光纖位移),需結(jié)合其他方法定期驗(yàn)證。
二、外部標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)
1. 適用場景
當(dāng)儀器用于定量分析(如核酸、蛋白濃度測定)時(shí),需通過標(biāo)準(zhǔn)溶液驗(yàn)證吸光度準(zhǔn)確性。
常用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)包括:
(3) NIST追溯標(biāo)準(zhǔn)溶液(如重鉻酸鉀溶液):用于多波長交叉驗(yàn)證。
2. 操作要點(diǎn)
(3)空白對照:使用同批次溶劑(如超純水)作為參比,避免溶劑雜質(zhì)干擾。
三、波長校準(zhǔn)
1. 必要性
波長準(zhǔn)確性直接影響定性分析(如特征吸收峰識別)。
超微量儀的氙燈光源或LED光源可能發(fā)生波長漂移,需定期校驗(yàn)。
2. 校準(zhǔn)方法
(3) 軟件校準(zhǔn):部分機(jī)型支持自動(dòng)掃描標(biāo)準(zhǔn)濾光片,通過算法修正波長偏移。
四、穩(wěn)定性與重復(fù)性檢測
1. 短期穩(wěn)定性
(1)連續(xù)測量同一標(biāo)準(zhǔn)樣品(如1 mg/mL BSA溶液)至少6次,記錄吸光度值(如280 nm下誤差應(yīng)<±0.005 OD);
(2)使用標(biāo)準(zhǔn)溶液周期性驗(yàn)證(如每周一次),記錄偏差趨勢。
五、特殊注意事項(xiàng)
1. 基座清潔與維護(hù)
(2)定期檢查光纖探頭是否磨損,避免光損失。
2. 環(huán)境控制
(2)避開強(qiáng)電磁場(如離心機(jī)、微波爐),防止信號噪聲。
3. 溯源性與合規(guī)性